摘要：谱度众合修饰位点检测服务交付从位点富集、位点精确定位到位点水平定量的完整数据，涵盖位点概览、差异位点筛选、功能富集、激酶-底物位点分析及位点占有率评估，构建从「哪个位点」到「位点怎么变」的完整分析链条。
您只需提供细胞、组织等样本，即可获得以位点为单位的深度检测报告。谱度众合蛋白翻译后修饰位点检测的核心交付物，不是一份「发现了多少种修饰」的清单，而是一份「在哪些残基上、变化了多少、功能意味着什么」的位点级数据报告。
1 位点检测技术原理
1.1 磷酸化位点：TiO2富集 + HCD碎片定位
酸性条件下TiO2选择性吸附带负电荷的磷酸化肽段，富集效率达95%以上。富集后的磷酸肽经HCD碎裂产生b/y系列碎片离子，通过相邻碎片离子间的质量差在S/T/Y残基水平上精确定位磷酸基团位置。公司专利富集装置（ZL 2019 1 1265126.0）进一步降低非特异性吸附，提升低丰度位点回收率。
1.2 N-糖基化位点：Ti-IMAC捕获 + PNGase F标记
Ti-IMAC选择性捕获N－糖肽后，PNGase F酶切释放糖链同时使N残基发生脱酰胺（+0.984 Da），质谱通过这一质量标记在具体N-X-S/T基序中的N残基上定位糖基化位点。专利串联富集技术（ZL 2024 1 0213201.3）提升低丰度糖肽位点的回收效率。
1.3 位点定位的核心挑战
当一条肽段含有多个S/T残基时，磷酸基团连接在哪个残基上仅凭前体质量无法判断。公司通过以下策略确保位点定位可靠性：HCD产生连续b/y碎片离子覆盖整个肽段序列；位点定位概率评分量化每个位点分配的置信度；低置信度模糊位点单独标注，不与高置信位点混排。
2 位点级报告交付内容
报告以「位点」为基本分析单元，从位点检测到位点功能层层递进：
2.1 位点概览
统计每个样本中检测到的修饰位点数量及其对应蛋白数；韦恩图展示组间共有与特有位点；位点定量值分布检验正态性；样本间位点定量相关性分析验证重复性。
2.2 差异位点筛选
基于差异倍数与P值阈值，筛选组间差异修饰位点（DESs）；PCA反映组间位点定量变异性；火山图展示差异位点全局分布；差异位点热图呈现各位点在样本中的定量模式。
2.3 位点功能富集
将差异位点映射至对应蛋白，进行GO/KEGG/COG功能富集、亚细胞定位、Pfam结构域及转录因子预测，揭示差异位点参与的生物学过程与信号通路。
2.4 位点互作网络
基于STRING构建差异位点对应蛋白的全局PPI网络，并依据差异倍数和节点连接度筛选核心枢纽位点蛋白，聚焦关键调控节点。
2.5 位点保守基序分析
提取各位点上下游氨基酸序列，识别位点周围的保守基序（motif），以motif logo展示代表性序列特征；差异位点的motif富集分析揭示不同激酶/识别模块偏好的位点序列背景。
2.6 激酶-底物位点分析（磷酸化专属）
这是磷酸化位点检测报告的核心模块：以位点定量数据为基础，定位差异位点对应的上游激酶；激酶树展示差异位点在激酶家族中的分布；激酶-底物关系网络呈现位点-激酶调控关系；KSEA分析预测上游激酶活性变化。这一模块直接回答「哪个激酶在调控哪个位点」。
3 特色位点级分析
3.1 位点占有率评估
通过比较修饰肽段与对应未修饰肽段的信号强度，评估特定位点的修饰占有率（stoichiometry），区分「蛋白丰度变化」与「位点占有率变化」，避免将蛋白表达下调误判为去修饰。
3.2 多修饰位点联合检测
专利串联富集技术支持同一份样本中磷酸化位点、泛素化位点、糖基化位点的联合检测，揭示不同修饰在位点层面的串扰（crosstalk）。
4 送样要求
细胞实验每组至少3个生物学重复，动物实验每组至少5个生物学重复。细胞样品：预冷PBS清洗后细胞沉淀，细胞数不少于1×10^7或沉淀体积不少于50μL，-20℃以下干冰寄送。动物组织：单一部位组织，预冷PBS清洗至无血色，重量不少于50mg，干冰寄送。
原标题：从位点定位到位点动态：谱度众合蛋白修饰位点检测交付内容全解析
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